Sérodiagnostic de l'hépatite

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Pour déterminer le virus de l'hépatite, obtenir des informations sur l'origine de la maladie, les conditions et les causes d'occurrence, le sérodiagnostic de l'hépatite C, b, a est effectué. L'identification des marqueurs sérologiques vous permet d'établir un diagnostic et de prendre le bon traitement. Les marqueurs comprennent des protéines virales, des anticorps spécifiques, que l'organisme produit en réponse à l'infection et aux acides nucléiques du virus.

Qu'est ce que c'est

Sérodiagnostic - reconnaissance de l'étiologie de maladies en détectant des anticorps dans le sang. Les marqueurs sérologiques sont des diagnostics tardifs, car les réactions sont possibles 10 à 12 jours après le début de la maladie. Des études sérodiagnostiques sont menées pour:

  • diagnostiquer la maladie - déterminer la présence d'anticorps dans le sang à l'aide d'antigènes standard;
  • identifier l'agent pathogène - pour identifier les antigènes inconnus.

Pour le sérodiagnostic, utilisez: cellules bactériennes; cellules plasmatiques et lymphocytes, cellules tumorales et malades; ingrédients solubles. Il existe 6 groupes de réactions sérologiques:

  1. Réactions liées à l’agrandissement des particules d’Ag.
  2. Complément des réactions de liaison et une hémolyse immunitaire.
  3. Réaction d'immunofluorescence.
  4. Réactions anti neutralisation
  5. Réaction avec la phagocytose.
  6. Réactions de l'analyse d'immunosorbants utilisant des antigènes et des anticorps.
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Que montre l'analyse?

Effectuer le sérodiagnostic prescrit aux patients, si pour une raison quelconque, il est impossible de diagnostiquer, à l'exclusion de la maladie. L'analyse identifie le type d'agent pathogène et aide à poser un diagnostic. En outre, le sérodiagnostic vous permet de choisir la meilleure option de traitement. Symptômes des tests: poussées déraisonnables, manque d’appétit, nausées, décoloration des selles et de l’urine, peau jaune. Le sérodiagnostic en temps opportun confirme ou nie l'infection et détermine le stade de la maladie.

Caractéristiques du sérodiagnostic et type d'hépatite

L'enveloppe de chaque virus possède son propre ensemble de protéines. Et les acides aminés qui composent la protéine sont considérés comme une sorte de code. Ce code est un marqueur de sérodiagnostic. Les marqueurs de l'hépatite A sont les IgM et IgG anti-VHA. Marqueurs de l'hépatite B - HBcAg, HBsAg, HBeAg. Les marqueurs du virus C - HBCAg. Pour le sérodiagnostic du virus A, on utilise: IEM (microscopie immunoélectronique), CSC (liaison au complément), RIA (utilisation d'Anti et Ag marqués), REMA (réaction enzymatique des anticorps). Le sérodiagnostic du virus B utilise les méthodes RIA, REMA, RPG (précipitation sur gel) et RIGA (hémagglutination indirecte). RIGA utilise des érythrocytes chargés d'HBsAg. Pour le sérodiagnostic de l’hépatite C, on utilise le dosage immunoenzymatique.

Marqueurs de l'hépatite A

L'étude sur l'hépatite A vise à déterminer les IgM et les IgG. Ces indicateurs apparaissent dans le sang dès que le taux d'enzymes sériques dans le corps augmente. IgM anti-VHA - est un indicateur du niveau d'anticorps M dirigés contre le virus de l'hépatite. Après l’infection, l’indicateur s’allonge et jusqu’à l'apparition des premiers symptômes, un test sanguin indique un résultat positif. IgG anti-VHA - cette classe est déterminée 10 semaines après l’infection dans le corps. Le plus souvent, l'indicateur reste élevé après la récupération, il indique que le processus de formation d'une immunité au virus de type A commence.

En utilisant le marqueur AgHBs, l'hépatite B peut être détectée à un stade précoce, l'antigène apparaissant aux jours 27 à 41 après que l'infection soit entrée dans le corps.

Marqueurs de l'hépatite B

L'étude vise à identifier des antigènes et des anticorps. Le sérodiagnostic vous permet de poser un diagnostic et de prédire l’évolution de la maladie. Pour chaque étape, un marqueur différent du VHB est détecté. Pendant la période d'incubation, l'antigène est stocké dans le sang pendant 2 à 5 mois. Un indicateur d'infection est la détermination simultanée de HB et de HB. Au début de la récupération, HBc et HBe disparaissent du sang, des anti-HBc se forment, puis des anticorps dirigés contre tous les types d’antigènes sont détectés dans le sang. La présence de HbsAg indique une infection. Si l'antigène est dans le sang pendant plus de six mois, la maladie en est à un stade chronique. Anti-HbsAg - montre que des anticorps se sont formés dans le corps et que le système immunitaire lutte activement contre le virus. HbsAg est détecté quelque temps après la récupération. L'anti-HbcAg est détecté avec des symptômes et se poursuit pendant toute la période.

Des études en laboratoire ont permis de détecter deux classes d'anticorps: les IgM - synthétisées dans les stades précoces et sont le signe d'une infection récente ou d'une activité élevée du virus. IgG - formée 2 à 3 mois après l'infection, fournit une immunité. L'indicateur HbeAg indique l'activité de l'infection. Les patients qui ont des antigènes dans le sang sont dangereux pour la transmission du virus, il faut donc faire attention. Lorsque l'anti-HbeAg est détecté, l'immunité commence à se former.

Marqueurs de l'hépatite C

Le virus de l'hépatite C se répliquant de manière inactive, il est donc difficile de diagnostiquer l'infection. Le seul moyen de détecter le virus C est de détecter l'ARN. Sa détermination est effectuée par dosage immunoenzymatique, en identifiant la quantité d’Anti-HCV. Les anticorps sont détectés 4 à 6 semaines après l'entrée du virus dans le sang. Pendant cette période, la formation et la circulation des IgM commencent. Après 3 mois, la synthèse des IgG commence. La détection à long terme d'IgM indique l'activité du virus et le stade chronique de la maladie. Dans la forme chronique, la détection d'IgM indique une atteinte hépatique. Le résultat d'un dosage immunoenzymatique n'est pas une base de diagnostic, la méthode est utilisée comme test de dépistage pour identifier la forme chronique. Après avoir trouvé des anticorps anti-VHC et une suspicion d'hépatite C, il est nécessaire de subir un examen de laboratoire complet.

Un dosage immunoenzymatique pour sérodiagnostic permet de détecter des anticorps anti-hépatite C dans 95% des cas de la forme chronique, la précision de la méthode étant de 50 à 70%.

Le sérodiagnostic n'a pas une spécificité ni une sensibilité de 100% dans le diagnostic de l'hépatite virale. Par conséquent, lors de l’évaluation des résultats, il est nécessaire de prendre en compte les symptômes et d’utiliser plusieurs tests pour confirmer le résultat. Lors de l'évaluation des résultats des études sérologiques, l'historique de la maladie, les informations sur les maladies antérieures et les vaccinations, ainsi que le contact possible avec la source de l'infection doivent être pris en compte.

Diagnostic sérologique de l'hépatite virale

Le diagnostic commence par l'examen du patient. Pour un diagnostic correct et opportun de "l'hépatite virale", les médecins examinent d'abord le patient, lui recommandent de faire des analyses de sang et d'urine.

Tout d’abord, ils sont attentifs aux symptômes caractéristiques de la période initiale de la maladie, tels que léthargie, faiblesse musculaire générale, perte d’appétit, nausées, gêne abdominale, coloration foncée de l’urine, élargissement et épaississement du foie, augmentation de la sensibilité de la douleur au bord inférieur. En général, les analyses des médecins du sang sont attentives au contenu en leucocytes, lymphocytes, ESR.

Ils ont recours à des analyses biochimiques du sang et de l’urine afin d’évaluer l’importance des lésions hépatiques et de confirmer si la jaunisse est associée à une inflammation du foie. Le plus significatif est le taux de pigment biliaire - la bilirubine, qui se forme dans le foie à la suite de la dégradation des globules rouges.

Normalement, la bilirubine est liée aux protéines du sang et n'a aucun effet toxique sur les tissus corporels. Avec l'hépatite, la concentration de bilirubine libre et liée dans le sang augmente fortement. Quand elle dépasse 200-400 mg / l, la jaunisse devient visible à l'œil nu.

Les dommages causés par les hépatocytes parlent d'un niveau croissant d'activité transaminase - ALAT et AST, qui pénètrent dans le sang à partir de cellules du foie par le biais de membranes endommagées. Il existe également des tests spéciaux sur l'état du système de coagulation du sang, dans lesquels des protéines synthétisées dans le foie sont impliquées. Une réaction positive de l'urine à l'urobiline a une valeur diagnostique.

La preuve d'une insuffisance hépatique est un test au thymol. Une modification de l'indice de prothrombine caractérise la gravité de l'hépatite virale et une augmentation de l'activité de la phosphatase alcaline, la bilirubine totale, indique une violation de la fonction de sécrétion du foie. La réaction de l'urine aux pigments biliaires au début de la maladie est beaucoup moins positive.

Dans le diagnostic d'importance non négligeable, les formes aiguës et chroniques de l'hépatite virale sont soumises à une échographie des organes de la cavité abdominale. En utilisant cette méthode, les médecins peuvent déterminer de tels changements qui ne sont pas détectés par un examen externe: foie hypertrophié, rétrécissement des veines hépatiques, induration et épaississement de leurs parois, signes d'inflammation de la vésicule biliaire et du pancréas, veines porte et spléniques dilatées, rate élargie, ganglions lymphatiques élargis. La méthode de diagnostic la plus importante, en particulier l'hépatite chronique, est la biopsie du foie.

Les méthodes de détection des anticorps et des antigènes dans le sang et d'autres liquides organiques incluent le diagnostic sérologique. Pour le diagnostic précoce de l'hépatite virale, y compris des formes asymptomatiques et anictères, la présence de protéines virales (antigènes, également appelés marqueurs de l'hépatite virale) ou d'anticorps dirigés contre celles-ci à l'aide d'une analyse immunoenzymatique (ELISA) est déterminée dans le sérum. De plus, l'ELISA est complétée autant que possible par une réaction en chaîne de la polymérase (PCR), qui permet de déterminer la présence d'acides nucléiques viraux dans le sérum - ADN du virus de l'hépatite B, virus de l'ARN des autres hépatites, ce qui est particulièrement important pour le début du traitement.

Test immuno-absorbant enzymatique (ELISA) - est une méthode universelle de diagnostic immunologique, largement utilisée dans la pratique. Il est conçu pour détecter les protéines virales (antigènes) ou les anticorps produits par le système immunitaire en réponse à la pénétration de virus dans le corps humain. Ces protéines sont des marqueurs ou des signes particuliers, dont la présence vous permet d’établir un diagnostic précis, d’évaluer la nature de la maladie et d’aider votre médecin à choisir le bon traitement. Cette méthode est basée sur l'interaction bien connue antigène-anticorps.

Pour identifier les antigènes, diverses sociétés commerciales produisent des systèmes de test qui sont des plaques de polystyrène à 96 puits. Au fond des puits, les anticorps sont pré-adsorbés («suturés») à l'un ou l'autre antigène de l'agent pathogène, par exemple à l'antigène de surface du virus de l'hépatite B - antigène HBs.

Lors de la première étape, un échantillon est ajouté à chaque puits, par exemple le sérum sanguin du patient à différentes dilutions, contenant une protéine virale (antigène) non encore déterminée. Si cette protéine (antigène) «reconnaît» son anticorps, leur liaison se produit. Cela signifie que le sérum du patient contient l'antigène, auquel les anticorps sont absorbés au bas de la plaque.

Afin de voir les résultats de cette réaction, il y a l'étape suivante, à laquelle un composé est ajouté au complexe "antigène-anticorps" qui se lie à l'anticorps. Ce composé contient une enzyme telle que la peroxydase de raifort. Lorsqu'un substrat y est ajouté, celui-ci est scindé, puis la solution est colorée en jaune-brun.

À l'étape suivante, chaque puits est soigneusement lavé des composants n'ayant pas réagi. Dans les puits où l'antigène, comme dans notre cas, est complètement lié à l'anticorps, il ne peut plus interagir avec le composé ajouté.

Par conséquent, il est retiré du puits pendant le blanchissage. À mesure que le sérum est dilué, la quantité d'anticorps qu'il contient diminue et ceux-ci ne sont plus en mesure de se lier complètement à l'antigène. Dans ces puits, le composé contenant l'enzyme se lie à l'antigène et reste dans le puits après le lavage. À l'étape suivante, ajoutez le substrat et observez les résultats de la réaction, qui est évaluée visuellement ou à l'aide d'un spectrophotomètre.

Ainsi, nous avons constaté que l’échantillon de sérum du patient contenait l’antigène HBs. Vous pouvez également connaître sa quantité ou son titre, en déterminant la dernière dilution du sérum, où une couleur jaune est apparue. Plus le degré de dilution est élevé, plus le virus est contenu dans le sang du patient.

De même, la présence d'anticorps dirigés contre un agent causal particulier de l'hépatite virale peut être déterminée. Ce n'est que dans ces cas-là que des systèmes de test de diagnostic «cousus» au fond des puits sont utilisés, non pas avec des anticorps, mais avec des antigènes connus. Les avantages de cette méthode sont une sensibilité et une spécificité élevées, une facilité de réaction, la possibilité d’examiner simultanément un grand nombre de patients. Parmi les inconvénients de la méthode, il y a le besoin d'un équipement spécial coûteux et de qualifications appropriées du personnel.

Méthode de réaction en chaîne de la polymérase

Dans les diagnostics de laboratoire modernes, la PCR occupe une place particulière. La méthode PCR a élevé les diagnostics de laboratoire clinique à une hauteur fondamentalement différente - le niveau de détermination des acides nucléiques (ADN et ARN), ce qui permet la détection directe d'un agent infectieux ou d'une mutation génétique dans n'importe quel milieu biologique.

En théorie, dans cette méthode de PCR, une molécule d'acide nucléique souhaitée parmi des millions d'autres peut être détectée. Du point de vue de la médecine clinique, la définition de l'acide nucléique équivaut à la détection de l'agent pathogène dans l'objet de l'étude.

Il est connu de la biologie que les acides nucléiques (ADN ou ARN) possèdent la propriété d’auto-reproduction (reproduction). Ce principe est à la base de la méthode de PCR, lorsque ce processus est effectué artificiellement en laboratoire. Pour cela, un acide nucléique est d'abord isolé à partir d'un échantillon de tissu provenant d'un patient (par exemple, en cas de suspicion d'hépatite virale).

Il joue le rôle d'une sorte de "matrice" sur laquelle la synthèse est effectuée. L'acide nucléique a sa propre "empreinte" - une séquence unique de nucléotides dont il est constitué. Pour chaque agent pathogène, une telle séquence a été étudiée, une sorte de «carte» a été compilée.

L'élément le plus important de la PCR est l'amorce (courtes sections d'ADN complémentaires (correspondantes) aux régions de l'acide nucléique isolé de l'échantillon). Les amorces fournissent le démarrage et la spécificité de la réaction.

Ainsi, le système de test pour la PCR consiste en un mélange d’acides nucléiques de l’échantillon à tester, d’un amorce et d’enzymes spéciales (polymérases) au travers desquelles cette réaction est impossible. L'analyse PCR implique plusieurs cycles (étapes), à la suite desquels des copies exactes d'une région reconnaissable de l'acide nucléique matrice sont obtenues. Ces cycles sont répétés 30 à 50 fois conformément à un programme donné. Le produit final de cette réaction est reconnu par électrophorèse sur gel.

Indicateur "Sensibilité"

L’un des critères les plus importants pour l’efficacité diagnostique de toute analyse de laboratoire est l’indicateur de «sensibilité». Il convient de faire la distinction entre sensibilité analytique et sensibilité diagnostique. La sensibilité analytique, telle qu'appliquée à la PCR, est le nombre minimum de copies d'ADN ou d'ARN dans 1 ml de solution d'échantillon, qui peut être déterminé par ce système de test.

La plupart des systèmes de test commerciaux peuvent détecter l'acide nucléique souhaité dans un échantillon biologique, même si sa concentration est de plusieurs centaines de copies pour 1 ml d'échantillon. Ceci est lié à la situation générale qui détermine l'adéquation clinique de toute méthode de diagnostic en laboratoire ou de tout système de test - la sensibilité de la méthode pour le diagnostic ne doit pas être inférieure à 95–98%.

Le deuxième critère universel de l'efficacité des laboratoires est la «spécificité», qui est déterminée par le pourcentage de personnes en bonne santé ayant des résultats d'analyse vraiment négatifs. La méthode de PCR a la plus haute spécificité, qui atteint 99-100%.

La sensibilité et la spécificité diagnostiques de la PCR sont comparables et dépassent souvent celles fournies par d'autres méthodes qui constituent le «gold standard» dans le diagnostic des maladies infectieuses.

Les résultats de l'analyse PCR peuvent être obtenus en un jour ouvrable, tandis que les échantillons prélevés pour analyse peuvent être stockés (accumulés) pendant plusieurs semaines, tout en respectant les normes de température appropriées. Une évaluation résumée de la sensibilité de diverses méthodes de diagnostic réalisée récemment dans plusieurs centres de recherche étrangers a montré que la sensibilité du test ELISA était comprise entre 50 et 70% et la PCR, entre 90 et 100%.

La PCR, comparée à l'ELISA et à d'autres méthodes, présente deux avantages importants: une sensibilité élevée et un temps d'analyse court, c'est-à-dire la "pertinence" d'obtenir un résultat de recherche à la fois par le médecin et le patient.

Avant d’autres méthodes de diagnostic de laboratoire clinique, la PCR présente les avantages suivants:

- La méthode permet de détecter tout ADN et ARN, même dans les cas où il est impossible de faire autre chose;

- la méthode a une grande spécificité (jusqu'à 100%). Cela est dû au fait que dans le matériel étudié, on trouve un fragment unique d’acide nucléique qui n’est caractéristique que d’un pathogène ou d’un gène donné;

- la possibilité d'effectuer non seulement une évaluation qualitative (disponibilité), mais également quantitative (concentration) du contenu en acide nucléique. Actuellement, à l'aide de systèmes de test commerciaux, il est possible de déterminer plusieurs centaines de copies dans l'échantillon à l'étude;

- la grande facilité de fabrication et l’automatisation de la méthode permettent au médecin d’obtenir les résultats de l’étude et de partager avec eux le patient le jour de l’analyse;

- la PCR permet d'identifier l'agent pathogène dans l'organisme avant le développement de la maladie, par exemple pendant la période d'incubation;

- pour effectuer une analyse PCR, un volume d'échantillon minimal est suffisant (jusqu'à plusieurs microlitres);

- L’analyse PCR vous permet de diagnostiquer simultanément plusieurs agents pathogènes dans un échantillon sans nuire à la sensibilité ou à la spécificité du résultat;

- Les résultats obtenus de la PCR peuvent être entrés dans des supports d’information informatiques ou photographiés pour une évaluation ultérieure par des experts indépendants.

Malgré les avantages ci-dessus, la méthode PCR n’est pas toujours dépourvue d’inconvénients à prendre en compte lors de l’évaluation des résultats de recherche:

- les exigences les plus strictes en matière d'équipements de laboratoire, la qualité des systèmes de test et le strict respect des réglementations en matière de recherche afin d'éviter les résultats erronés. Il est possible de résoudre le problème de la qualité des analyses avec des qualifications appropriées du personnel et une certification obligatoire du laboratoire.

- évaluation ambiguë d'un résultat de PCR positif. C'est ce fait qui est souvent un argument déraisonnable de la part des praticiens pour douter du résultat obtenu et de l'efficacité de la méthode PCR. Par exemple, chez les individus dont l'ADN de l'agent pathogène est détecté dans le sang par la méthode PCR, la maladie peut ne pas se développer cliniquement.

Dans cette situation, lors de l'évaluation de l'analyse PCR, il convient de parler d'un patient infecté et non du développement d'une maladie infectieuse. La méthode de PCR - analyse permet de déterminer la présence ou l’absence de l’agent pathogène, répond largement à la question "traiter non traiter" et permet également d’évaluer la qualité du traitement en surveillant la présence ou l’absence de l’agent pathogène. Le médecin, qui évalue le résultat de l'analyse PCR, réalise que ce résultat n'est pas le seul argument pour prendre la décision de commencer le traitement ou de le refuser.

Des systèmes de test ont été développés pour chaque type d'agent pathogène de l'hépatite virale, mais la méthode de PCR la plus précieuse a été trouvée dans le diagnostic de l'hépatite B, C, D, G. La méthode de la PCR est extrêmement importante pour le diagnostic de l'hépatite B. il existe des mutants (avec des traits modifiés), qui ne sont pas déterminés par les tests sérologiques classiques.

La méthode d’analyse par PCR permet d’identifier, et sous quelle forme est le virus de l’hépatite 15, qu’il soit capable de reproduction indépendante ou intégré (intégré) dans l’ADN de la cellule hôte. Ceci revêt une importance clinique cruciale car avec la forme intégrative de cette infection, une personne n'est pas contagieuse pour autrui (sécurité du partenaire sexuel, aptitude professionnelle, aucun risque de transmission verticale du virus de la mère au fœtus, etc.).

En outre, la thérapie antivirale n’est pas indiquée chez ces patients et est même dangereuse. Cependant, avec une forme d’infection intégrative, le risque de cancer du foie augmente considérablement (plus de 200 fois). Ces personnes doivent subir un examen clinique complet ainsi que des examens de laboratoire et des instruments au moins une fois par an.

La méthode PCR peut servir d’arbitre pour déterminer la nécessité de commencer un traitement et de contrôler son efficacité. La disparition rapide de l'ADN du virus de l'hépatite B dans le sang constitue un test direct et fiable du succès du traitement antiviral.

Ainsi, la détermination de l'ADN du virus de l'hépatite B dans le plasma sanguin est l'analyse la plus importante. Elle permet, avec d'autres tests de laboratoire, de diagnostiquer objectivement une infection, de déterminer la nature du processus infectieux, d'agir comme critère de conduite du traitement et d'évaluer son efficacité.

La méthode de la PCR - l’analyse est inégalée dans le diagnostic, l’évaluation du pronostic et le succès du traitement antiviral de l’infection causée par le virus de l’hépatite C. L’utilisation de la PCR permet de détecter le virus de l’hépatite C le plus tôt possible, car l’ARN du virus de l’hépatite C peut être détecté dans le sérum sanguin une semaine après l'infection. Avec cette méthode, les variétés génétiques de ce virus sont déterminées, ce qui permet au médecin de prescrire le traitement approprié.

Dans le cas de l'hépatite virale D, la méthode d'analyse par PCR permet la détermination de l'ARN viral dans le sérum du patient, ainsi que des infections mixtes hépatite B et D. Par conséquent, cette méthode de recherche peut être utilisée pour surveiller l'efficacité du traitement, le pronostic de l'évolution et les résultats de la maladie. Il est important que le médecin détermine s’il existe une infection mixte, car l’hépatite D renforce l’effet nécrotique de l’hépatite B et augmente donc le risque de développement.

La méthode d’analyse PCR est actuellement le seul moyen de prouver la présence d’une infection par le virus de l’hépatite C.

Considérez l'utilisation de méthodes de diagnostic pour différentes hépatites.

Hépatite E. Les principales caractéristiques diagnostiques du virus de l'hépatite E sont les suivantes: l'hypothèse d'un mécanisme de transmission de l'eau, l'âge du patient est de 20 à 40 ans, la prévalence dans les régions est principalement tropicale et subtropicale, les manifestations cliniques sont similaires à l'hépatite A avec une prédominance de formes bénignes, l'enregistrement de formes sévères avec la menace de létal les résultats chez les femmes enceintes au cours de la seconde moitié de la grossesse, moins souvent au début du post-partum et chez les mères allaitantes (se manifestent par une hémolyse intensive, une hémoglobinurie, une insuffisance rénale aiguë syndrome de thrombohémorragie sévère). Confirme le diagnostic de la détection des anticorps dans le sang.

Hépatite B. L’hépatite B virale est suspectée par un médecin si le patient a été transfusé avec du sang ou ses composants (érythrocytes, leucocytes, masse plaquettaire) 45 à 180 jours avant l’apparition de la maladie, des interventions chirurgicales, des études sur les organes internes, des injections multiples (y compris des médicaments). ), ou beaucoup moins fréquemment, si le patient a eu un contact sexuel ou étroit avec un patient atteint d’hépatite B. Le critère de confirmation précoce du diagnostic est la détection des antigènes HBs, HBe et HBc dans le sang et de l’ADN viral.

Marqueurs sérologiques pour l'hépatite B aiguë

Hépatite C. Contrairement à l'hépatite B, pour le diagnostic des marqueurs antigéniques et d'anticorps pris en compte, dans l'hépatite C, seuls les anticorps sont capturés par ELISA, ce qui est associé à une faible concentration du virus dans le sang. Les antigènes du virus de l'hépatite C peuvent être détectés dans les échantillons de biopsie du foie.

Le diagnostic de laboratoire comprend trois principaux types de tests.

Marqueurs sérologiques pour l'hépatite C aiguë

Détection d'anticorps. Malgré leur grande spécificité, les systèmes de dosage immunoenzymatiques modernes ne sont pas assurés contre le surdiagnostic, c’est-à-dire des résultats positifs en retard. Pour les exclure, il faut également procéder à une évaluation à partir des résultats des analyses obtenues à des intervalles de temps différents. Des résultats faussement négatifs sont également possibles lorsque des anticorps antiviraux ne peuvent pas être détectés, malgré la présence d'un virus dans l'organisme. Cela se produit dans les cas suivants:

- la période initiale de la maladie;

- pendant que les patients prennent des immunosuppresseurs - des médicaments qui suppriment le système immunitaire;

- à l’infection par certains génotypes (d’abord 3 et 4).

Actuellement, des systèmes de test commerciaux sont en cours de production pour détecter les anticorps anti-virus de l'hépatite C du premier génotype. Toutefois, ces tests peuvent ne pas être suffisamment efficaces pour permettre une détection fiable des anticorps infectés par un virus de génotype différent. Cela revêt une grande importance pour les régions où prédominent d’autres types de virus. Ainsi, un test hautement sensible pouvant réagir avec des anticorps anti-virus de l'hépatite C de tout génotype est nécessaire pour un diagnostic efficace de l'hépatite C.

Détermination de l'ARN viral. L'ARN du virus de l'hépatite C est détecté à des fins de diagnostic.A ce jour, ce test est considéré comme le «gold standard» du diagnostic de l'hépatite C. La version classique de la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est la plus largement utilisée. Avec son aide, il est possible de surveiller la reproduction du virus, ainsi que de juger de sa présence dans le foie et d'autres tissus. La définition de l'ARN est le plus souvent utilisée pour confirmer le résultat de la détection d'anticorps, établir un diagnostic précoce d'hépatite aiguë (l'ARN viral peut être détecté dès 7-21 jours après l'infection, c'est-à-dire bien avant l'apparition des premiers anticorps), pour surveiller les femmes enceintes pendant la période d'infection périnatale et surveiller l'efficacité du traitement antiviral.

Les données de ces deux tests se complètent bien. Les résultats positifs de l'analyse PCR combinés à des résultats négatifs pour les anticorps antiviraux sont caractéristiques de certaines périodes d'hépatite aiguë. Les indicateurs négatifs des analyses PCR sur le fond du test d'anticorps positif peuvent être dus à une faible concentration de virus dans le sang (non détectable dans la PCR). Des analyses de sang répétées positives par PCR reflètent l'activation du virus dans les cellules du foie ou d'autres organes.

En outre, la PCR est utilisée pour détecter le virus dans le tissu hépatique prélevé lors de la biopsie. Cela donne des informations plus complètes sur le développement du processus infectieux, car le virus peut rester longtemps dans les hépatocytes sans pénétrer dans le sang ni y être présent à de faibles concentrations. Cela survient le plus souvent dans les premiers stades de l'infection, mais est également observé dans l'hépatite chronique.

Définition des protéines (antigènes) du virus de l’hépatite C. La principale possibilité de détection des protéines du virus de l’hépatite C a été établie peu de temps après la découverte de ce virus dans le cadre d’une étude immunofluorescente sur des tissus prélevés dans le foie de personnes atteintes d’hépatite C chronique infectées par des chimpanzés et par ce virus.

La détermination de protéines virales (antigènes) dans le sérum en raison de leur faible contenu n'a pas été possible longtemps. Ce n'est que récemment que des approches méthodologiques ont été développées pour la détection immunofermentale de la protéine C interne dans le sang et que la production des premiers systèmes de test commerciaux a été organisée. Leur mise en pratique permettra de résoudre des problèmes controversés de diagnostic sur une base plus économique que la définition de l'ARN viral. Déterminer les niveaux d'AlAT est la méthode la moins coûteuse pour évaluer l'activité de l'évolution de l'hépatite C. Cependant, une fois obtenues, les données obtenues risquent de ne plus être suffisantes pour déterminer la gravité de la maladie.

Des informations plus importantes concernant les dommages au foie peuvent être obtenues en déterminant la concentration d'ALT pendant plusieurs mois. Pour obtenir des informations sur l'étendue des dommages au foie qui ne sont pas disponibles avec d'autres méthodes de recherche, un médecin peut faire une biopsie du foie. Les données obtenues à la suite de cette procédure permettent de décider en faveur de l’instauration ou de l’annulation du traitement antiviral.

L'article utilise des matériaux de sources ouvertes: Auteur: Trofimov S. - Livre: "Maladies du foie"

RÉSUMÉ Diagnostic par marqueur d'hépatite B et C aiguë et chronique

Agence fédérale d'éducation

Établissement d'enseignement public d'enseignement professionnel supérieur

Université d'État d'Oulianovsk

Institut de médecine, écologie et culture physique

Département des maladies infectieuses et vénériennes de la peau

Discipline "Maladies infectieuses"

DIAGNOSTIC DE MARQUEUR DE L’HÉPATITE B ET C CHRONIQUE

La tête Département: Professeur.

Agence fédérale d'éducation

Établissement d'enseignement public d'enseignement professionnel supérieur

Université d'État d'Oulianovsk

Institut de médecine, écologie et culture physique

Département des maladies infectieuses et vénériennes de la peau

Détection de marqueurs sérologiques de l'hépatite virale.... 3 pages

Sérodiagnostic de l'hépatite virale B …………………………. 4 pages

Sérodiagnostic de l'hépatite virale C ……………………………….10 p

Liste de la littérature utilisée. ………………………….. 19 pp.

Agence fédérale d'éducation

Établissement d'enseignement public d'enseignement professionnel supérieur

Université d'État d'Oulianovsk

Institut de médecine, écologie et culture physique

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Détection de marqueurs sérologiques de l'hépatite virale

Il est possible d'établir la nature virale de l'hépatite et d'obtenir des informations sur son étiologie uniquement en identifiant les marqueurs sérologiques des virus de l'hépatite. Ces marqueurs comprennent les protéines virales (antigènes), les anticorps spécifiques produits par l'organisme en réponse à une infection et les acides nucléiques viraux (ADN ou ARN), qui représentent son génome. La combinaison de méthodes de détection de protéines virales ou bactériennes (antigènes) ou d'anticorps spécifiques produits chez l'hôte en présence de l'un ou l'autre agent pathogène dans les tissus et liquides biologiques est appelée méthode immunologique d'analyse en laboratoire. Au cours des dernières décennies, les méthodes de recherche immunologique se sont généralisées. La raison en est la fusion étroite de l’immunologie et de la biotechnologie, qui a permis de développer et de mettre en pratique un large éventail de systèmes de test basés sur l’interaction antigène-anticorps. Pour l'hépatite virale, ELISA fait référence à des méthodes indirectes de détection de l'agent pathogène, permettant d'établir l'étiologie de la maladie. Récemment, les méthodes de génodiagnostic ont été introduites dans la pratique des laboratoires de diagnostic clinique, qui permettent la détection et la caractérisation de gènes ou de séquences d'ADN et / ou d'ARN non sensuelles. Leur développement est dû au développement en 1983 du principe de la réaction en chaîne de la polymérase (PCR). Les premiers rapports sur l'application pratique de la PCR sont apparus en 1985 et depuis lors, le nombre de publications où la PCR est utilisée comme l'une des méthodes de recherche est l'un des premiers endroits dans la littérature scientifique mondiale. Ces approches sont applicables à la détection et à l'étude de génomes infectieux

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agents, détection de marqueurs de maladies oncologiques, détection de modifications génétiques du génome humain associées à certains troubles fonctionnels. Contrairement à l'ELISA, l'analyse PCR fait référence à des méthodes directes de détection de l'agent pathogène dans du matériel clinique, ce qui permet d'évaluer l'activité du processus viral et de suivre les processus de propagation de l'agent pathogène dans divers organes et tissus.

Sérodiagnostic de l'hépatite virale B.

Le virus de l'hépatite B (virus de l'hépatite B, VHB) appartient à la famille des Hepadnoviridae. Le génome du virus est représenté par une molécule d'ADN circulaire partiellement doublée de 3 200 pb. En microscopie optique, le VHB ressemble à une particule sphérique de 42 nm de diamètre (particule de Dane) constituée d'un noyau - un nucléoïde en forme d'icosaèdre de 28 nm de diamètre, à l'intérieur duquel se trouvent une enzyme double brin, ADN protéique et ADN polymérase. La protéine nucléoïde contient HBcAg et HBeAg. L'enveloppe externe (7 nm d'épaisseur) est formée par l'antigène de surface du HBV - HBsAg. Le virus de l'hépatite B est un pseudorétrovirus, c'est-à-dire que son ADN peut être partiellement inséré dans le génome de l'hépatocyte.

Avec AVH et l'exacerbation d'une hépatite chronique, des particules virales peuvent être détectées dans les hépatocytes et le sérum du patient. Avec la forme intégrative de l'hépatite B chronique et au stade de la rémission, le VHB dans le sérum n'est pas détecté. Le diagnostic de laboratoire de l’infection par le VHB repose sur la détermination des marqueurs sérologiques de l’infection virale: AgHBs, AgHBe, IgM et IgG anti-HBc, anti-HBe et anti-HBs, ADN du VHB et ADN polymérase virale. Selon l'évolution de l'hépatite virale B, le spectre de modifications des marqueurs sérologiques est différent.

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HBsAg est un marqueur majeur de l'infection par le VHB. Dans le virus viral aigu B, dans la plupart des cas (90 à 80%), l’HBsAg peut être détecté au cours de la période d’incubation à partir de la 3e semaine de l’infection. La durée moyenne de la circulation de l'antigène est de 70 à 80 jours. La disparition rapide de HBsAg (dans les premiers jours de la jaunisse) avec l'apparition d'antiBB est un signe de mauvais pronostic. Dans l’hépatite B chronique, l’HBsAg peut circuler dans le sang du patient pendant de nombreuses années. Il convient de noter que les méthodes actuellement utilisées pour la détermination de l’HBsAg, y compris la méthode ELISA, ont un seuil de sensibilité. Par conséquent, en présence de signes cliniques d'hépatite et d'absence d'HBsAg dans le sérum, il est nécessaire d'étudier d'autres marqueurs de l'infection par le VHB. La présence d'HBsAg dans le sang indique la présence d'un virus dans le foie et est très probable dans le sang. Tous les sérums contenant l'AgHBs ne contiennent pas le virus de l'hépatite B. Dans certains cas, l'ADN du virus n'est pas complètement intégré à l'ADN de l'hépatocyte, mais partiellement, uniquement par la région qui code pour la synthèse de l'HBsAg. Dans ces cas, HBsAg est synthétisé sans autres composants du virion (c'est-à-dire sans autres antigènes). On pense que cette situation se produit lorsque le HBsAg porteur "en bonne santé". AgHBe du virus de l'hépatite B caractérise une haute infectivité du sang, étant un indicateur de la réplication active du VHB. AgHBe ne circule dans le sang du patient qu'en présence d'HBsAg. Au cours de la première semaine de la période ictérique, il est détecté chez 85 à 95% des patients. La détection de l'AgHBe pendant deux mois ou plus sert de signe pronostique du développement d'une hépatite chronique. Chez la majorité des patients atteints d'hépatite chronique avec une activité élevée du processus AgHBe, il persiste longtemps (jusqu'à plusieurs années). Les anticorps contre l'antigène nucléaire du virus de l'hépatite B de classe M (IgM anti-HBc) sont un marqueur de la réplication active du VHB et de l'infection aiguë. Identifié 1 à 2 semaines après la découverte de l'HBsAg et persistant pendant 2 à 18 mois. Chez 4 à 20% des patients atteints d'hépatite B aiguë, les IgM anti-HBc sont le seul marqueur de l'infection. À

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La CG dans IgM anti-HBc peut être détectée chez certains patients présentant des titres plus faibles que dans les cas d'infection aiguë, le titre en anticorps reflétant la gravité de l'hépatite. Les anticorps anti-HBcAg de classe G (IgG anti-HBc) apparaissent presque simultanément avec les IgM anti-HBc. En règle générale, ils restent avec toutes les personnes qui ont eu l'hépatite B pour la vie. L'IgG anti-HBc circule avec HBsAg chez 95% des porteurs d'HBsAg. Les anticorps anti-HBs (anti-HBs) indiquent une infection antérieure ou la présence d'une immunité post-vaccination (niveau de protection - 10 UI / ml). Ils apparaissent dans la période de récupération, 4 semaines après la disparition de HBsAg, atteignant une concentration maximale dans un à deux ans, suivie d'une diminution progressive du niveau inaccessible au dépistage par les méthodes de diagnostic modernes. Dans certains cas, les anti-HBs peuvent circuler à vie. L’apparition d’anti-HBs dans le contexte d’une amélioration clinique chez un patient atteint d’hépatite B est un bon signe pronostique. Il est important de noter que dans la dynamique de l'infection aiguë par le VHB, il existe une «fenêtre» lorsque l'HBsAg n'est plus défini et que les anti-HBs ne sont pas encore apparus. Dans le même temps, des IgM et IgG anti-HBc sont détectés. Il s’ensuit qu’il est nécessaire d’examiner les patients atteints d’AVH avec IgM anti-HBc, même si les résultats de l’étude HBsAg et anti-HBs sont négatifs. Les anticorps anti-HBe (HBeAg) apparaissent dans le sang après l'élimination de HBeAg et la fin de la réplication virale. À la fin de la neuvième semaine de la période aiguë de l'hépatite B, plus de 90% des patients étaient anti-HBe. Pendant la période de récupération, les anti-HBe peuvent disparaître. Cependant, la présence d'anti-HBe n'est pas une indication de l'absence de caractère infectieux d'un sérum particulier. Il a été démontré que, lors du développement de l'hépatite B (environ 10%), sous l'influence de la "pression immunitaire" sur le virus, des formes mutantes apparaissent qui "évitent" la surveillance immunitaire et ne sont pas éliminées. Un mutant a été isolé chez des porteurs d'anti-HBe, incapable de produire HBeAg en raison de défauts dans la région précore et a été désigné comme HBeAg négatif. L’apparition d’un mutant HBeAg négatif entraîne la progression des dommages au foie lorsque

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poursuite de la réplication virale (présence d'ADN du VHB dans le sérum). La primo-infection par le mutant AgHBe négatif augmente considérablement le risque d'hépatite fulminante. Les marqueurs décrits de l’hépatite B sont examinés par ELISA. Le spectre des anticorps (anti-HBe, anti-HBs, IgM anti-HBc, IgG anti-HBc) et des antigènes (HBsAg, HBeAg) vous permet d'établir le diagnostic de l'hépatite B et de déterminer le stade de la maladie (Tableau 3). L'inconvénient de cette méthode est l'impossibilité de l'utiliser dans l'infection par des formes mutantes du virus, par l'immunosuppression (patients cancéreux, toxicomanes, etc.) et par l'évaluation quantitative de l'agent pathogène présent dans l'organisme. La résolution de ces problèmes est devenue possible grâce à l'introduction de méthodes de biologie moléculaire dans la pratique des laboratoires de diagnostic clinique.

Tableau 3. Différentes combinaisons de marqueurs sérologiques de l'infection par le virus de l'hépatite B et leur interprétation

Diagnostic sérologique de l'hépatite virale

M. Chisinau, Blvd. Carte Traian 7/1

022 944 944 069 944 944 069 944 949
Du lundi au vendredi de 7h30 à 19h00, le samedi de 8h00 à 13h00

S'il n'y a pas assez de données cliniques et épidémiologiques pour présupposer l'étiologie de l'hépatite, les marqueurs sérologiques suivants sont examinés au premier stade:

  • HAVAb, IgM (hépatite A aiguë)
  • HEVAb, IgM (hépatite aiguë E)
  • HBsAg, HBcAb (hépatite B)
  • HCVAb (hépatite C)

En cas de réaction positive à HBsAg et (ou) HBcorAb total, il est nécessaire de préciser le diagnostic du stade du processus d'infection en testant:

La persistance prolongée d'HBcorAb, avec des tests négatifs d'HBsAg et d'HBsAb, peut être le seul marqueur d'une infection chronique par une souche mutante de l'hépatite B.

Diagnostic de la co-infection ou de la surinfection avec le virus de l’hépatite Delta:

Pour une réaction positive à HCVAb, des recherches supplémentaires sont nécessaires:

  • HCVAb, IgM
  • Spectre de protéines HCVAb en ELISA ou immunoblot
  • VHC, ARN

Pour évaluer le pronostic de l'hépatite C et la réponse au traitement par interféron, nous vous recommandons de taper le VHC.

Marqueurs diagnostiques de l'hépatite virale et interprétation clinique des résultats

Marqueur

La définition

Interprétation clinique

Marqueurs de l'hépatite A

Marqueurs de l'hépatite E

Marqueurs de l'hépatite B

Marqueurs de l'hépatite D (delta)

Marqueurs de l'hépatite C

Marqueurs de l'hépatite G

La quantité recommandée d'examen de pré-vaccination:
Avant la vaccination contre le virus de l'hépatite B, il est nécessaire de mener une étude:

L'identification d'un titre élevé d'anticorps protecteurs: HBsAb indique que l'infection a déjà été transférée, qu'il existe une immunité stable et qu'il n'est pas nécessaire de se faire vacciner. Les réactions positives à HBsAg et HBcAb indiquant la présence d'une infection nécessitent une décision individuelle sur le caractère approprié de l'introduction du vaccin.

Source: USAID, Ministerul Sanatatii al Republicii Moldova. Diagnostic de laboratoire à l'hépatite virale B, C si D. Instructiuni, 2007

En cas de réactions négatives lors de la détection de marqueurs des hépatites virales A, B, C et D, l'hépatite causée par le virus d'Epstein-Barr et la cytomégalie doivent être exclues:

  • CMV, IgG
  • CMV, IgM
  • EBV, antigène précoce, IgG
  • Antigène nucléaire EBV, IgG
  • EBV VCA (antigène de capside), IgG
  • Epstein Barr Virus VCA (antigène de la capside), IgM

DIAGNOSTIC DE LABORATOIRE SUR L’HEPATITE VIRALE

A. A. Asratyan Institut d'épidémiologie et de microbiologie N.F.Hamal et RAMS,
Académie de médecine de Moscou. I.M.Shechenova

Le diagnostic de laboratoire de l'hépatite virale repose sur:

- connaissance de leurs agents pathogènes et de leur réplication

- informations sur l'apparition et la disparition de marqueurs d'infection

- méthodes biologiques immunochimiques et moléculaires modernes de détection d'antigènes, d'anticorps et d'acides nucléiques /

Diagnostic de laboratoire de l'hépatite B (HB) La structure du virion, voir fig. 1

Diagnostic en laboratoire de l'hépatite B - basé sur l'identification d'antigènes spécifiques de HB et des anticorps correspondants dans le sang, ainsi que d'acides nucléiques viraux, dont les principaux sont:

anti-HBs de classe Ig M et IgG

NVE Ag - anti-NVE

Le plus largement utilisé dans le diagnostic des HBs est la définition de HBsAg. Cet antigène est détecté dans les maladies aiguës et chroniques (toutefois, l'infection aiguë est généralement confirmée par la présence de titres élevés d'IgM anti-HBc). Dans le VHB aigu, l'antigène de surface du virus est détecté 3 à 5 semaines après le début de l'infection, c'est-à-dire bien avant l'apparition des signes cliniques de la maladie et constitue dans ces cas le seul marqueur sérologique. HBsAg est constamment détecté dans les périodes pré-oculaire et ictérique de la maladie. La persistance de l'HBsAg pendant 6 mois ou plus indique un cours prolongé ou chronique de la maladie et suggère un état de porteur chronique du virus. L'élimination de HBsAg et l'apparition d'anticorps anti-HBs est une condition indispensable à la récupération. Les marqueurs sérologiques de la réplication du VHB sont les anti-HBs de la classe des IgM, les AgHBe, l'ADN et l'ADN polymérase, détectés dans le VHB aigu dès les premiers jours des manifestations cliniques et pouvant être détectés lors de l'exacerbation du VHB chronique. Les marqueurs sérologiques de la réplication du VHB sont déterminés à la fois pour le diagnostic général et pour évaluer l'efficacité du traitement utilisé. HBcAg est détecté dans le tissu hépatique et non dans le sérum. La médiation par sa présence dans le corps reflète les anticorps circulants - IgM et IgG anti-HBc. Dans la période aiguë de l'HB, la présence d'IgM anti-HBc est un marqueur supplémentaire de cette maladie. Cependant, il est nécessaire de prendre en compte le fait qu'environ 50% des patients atteints d'hépatite B chronique peuvent également posséder ces anticorps lors de la période d'exacerbation, mais plus souvent à de faibles concentrations. La présence de seules IgG anti-HBc dans le sérum est observée entre la disparition de HBsAg et la formation d'anti-HBs. La détection combinée d'IgG anti-HBc de classe faible avec anti-HBs indique une infection par HB transférée et la présence d'une immunité. Le test de HBeAg est effectué dans des sérums sanguins uniquement en présence de HBsAg et le résultat positif de ce marqueur indique un processus actif - confirme le diagnostic de HBV aigu ou indique une exacerbation de HB chronique. La durée de la circulation de l'HBeAg a une valeur pronostique importante: l'identification de l'HBeAg 2 mois ou plus après le début de la maladie indique un développement possible de l'hépatite chronique. La détection d'HBeAg sans la présence d'HBsAg dans le sérum indique dans la plupart des cas un résultat faux de l'analyse. Cependant, malgré la persistance de l'infectivité et la présence d'anti-HBe, les patients infectés par le virus mutant peuvent rester séronégatifs pour l'AgHBe La présence d'ADN du VHB (marqueur le plus sensible de la réplication en cours du VHB) dans le sérum indique une haute infectivité de cet échantillon et une reproduction active du virus dans le corps. Un résultat positif peut être enregistré chez presque tous les patients atteints du VHB aigu au milieu de la maladie. Réduire sa concentration dans le traitement de l'hépatite chronique est un signe de bon pronostic indiquant l'efficacité du traitement utilisé. La haute activité des aminotransférases sériques reflète des lésions inflammatoires du tissu hépatique, causées principalement par des réactions du système immunitaire de l'organisme contre des hépatocytes infectés par le virus, et non par l'effet cytopathique direct du virus. Un taux élevé d'ADN du VHB associé à un faible taux d'aminotransférases indique une réponse immunitaire insuffisante de l'organisme. La détection d'anti-HBe en l'absence d'HBeAg et d'ADN du VHB indique que la réplication active de l'infection est terminée. La séroconversion de HBsAg dans les anti-HBs survient chez 90 à 95% des patients atteints d'HBs aiguë au stade de résolution du processus infectieux et est un indicateur de l'immunité au virus HBV, c'est-à-dire que la présence d'anti-HBs indique une infection et la présence d'immunité à cette infection. Les personnes ayant ces anticorps à une concentration protectrice (10 UI ou plus) ne souffrent pas de SH et ne doivent pas être vaccinées. Toutes les méthodes de recherche appliquée pour la détermination de marqueurs spécifiques de HB peuvent être divisées en 2 groupes - immunochimique et biologique moléculaire. Immunochimique - l’endroit principal appartient au dosage ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) avec sa haute sensibilité et spécificité, sa facilité de mise en oeuvre et la stabilité des réactifs. La biologie moléculaire - l'hybridation ponctuelle et liquide, ainsi que la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) - vous permet de détecter la présence d'ADN du VHB, en déterminant l'enzyme spécifique du virus - l'ADN polymérase. HB sAg / anti-HB s Pour identifier le principal marqueur du VHB, diverses méthodes ont été développées pour déterminer l'antigène à des concentrations pouvant atteindre 0,05 ng / ml, réparties en «générations» (Tableau 1). ELISA constitue actuellement la principale méthode de détection de l'HBsAg. Une étape importante dans le développement du diagnostic de laboratoire de l'hépatite virale en Russie a été la réalisation (depuis 1998) de tests comparatifs des produits de diagnostic permettant d'évaluer leur qualité sous les auspices du ministère de la Santé de la Fédération de Russie. Les produits de diagnostic modernes ont une spécificité élevée, mais des résultats faussement positifs sont possibles. Pour distinguer les faux positifs des résultats vraiment positifs, un test de neutralisation de HBsAg, un sérum spécifique, est utilisé. La nouveauté du système de détection de l'AgHBs était l'exigence imposée aux fabricants nationaux de médicaments de diagnostic - l'inclusion obligatoire dans le système de test d'un échantillon de contrôle faiblement positif contenant de l'HBsAg à une concentration de 1 ng / ml. Pour déterminer l'anti-HBsAg, nous avons testé l'ensemble des méthodes immunochimiques, dont la principale est désormais la méthode ELISA (pour l'analyse qualitative et quantitative). Ig M et IgG anti-HBc, HBe Ag - anti-HBe (Fig. 2 et Tableau 2) Pour tester ces marqueurs, différents types de dosage immunologique en phase solide peuvent être utilisés: immuno-enzyme, dosage radioimmunologique, chimioluminescent et leurs différentes variantes. L'ADN du VHB est déterminé par analyse PCR. Actuellement, les méthodes d'amplification les plus largement utilisées pour détecter l'ADN du VHB. Il est maintenant possible de déterminer l'ADN du VHB sous une forme qualitative et quantitative.

Diagnostic en laboratoire de l'hépatite D (DG) Le virus de l'hépatite D (PIO) est un virus défectueux contenant un ARN hélicoïdal unique qui nécessite l'aide du virus VHB pour la réplication afin de synthétiser des protéines d'enveloppe constituées d'HBsAg, utilisé pour encapsuler le génome de la PIO. La PIO n'appartient à aucune des familles connues de virus animaux, de par ses propriétés, la PIO est la plus proche des viroïdes et des virus satellites des plantes. Le diagnostic de laboratoire consiste à détecter les marqueurs sérologiques de la PIO, y compris la présence d'antigène, d'anticorps dirigés contre elle et d'ARN de la PIO. La détection de l’antigène de la PIO et de l’ARN de la PIO dans le sérum ou le tissu hépatique indique la présence d’une infection à HG active. Toutefois, il convient de noter que ces marqueurs peuvent ne pas être détectés dans le sérum de patients atteints de HD fulminante. Le marqueur de réplication active de la PIO est également l'IgM anti-PIO. Les marqueurs sérologiques de l'infection à HD dépendent de la manière dont le virus a été acquis - sous la forme d'une co-infection par le VHB (chez la plupart des patients, la maladie évolue de manière aiguë et se termine par une guérison) ou de la surinfection chez les patients atteints d'une infection chronique par le VHB (plus difficile que la co-infection) - 10% se développent hépatite fulminante). Lorsqu'ils sont co-infectés dans la plupart des cas, des anticorps - IgM et IgG anti-classe de PIO - sont détectés au cours de l'évolution de la maladie. Le titre anti-PIO est généralement réduit à des niveaux pratiquement indétectables après la récupération, et il ne reste aucun marqueur sérologique indiquant qu'une personne a déjà été infectée par la PIO. L'antigène de la PIO n'est détecté que chez 25% des patients et disparaît généralement avec la disparition de HBsAg. Surinfecté chez les patients infectés par le VHB chronique, le tableau sérologique présente les caractéristiques suivantes: - le titre de l’HBsAg est réduit lorsque l’antigène de la PIO apparaît dans le sérum; - L'antigène de la PIO et l'ARN-PIO continuent d'être détectés dans le sérum, comme chez la plupart des patients présentant une surinfection à HG (70 à 80%), une infection chronique se développe, contrairement aux cas de coïnfection; - Les titres d'anticorps élevés (anti-PIO) de la classe des IgM et des IgG sont déterminés, lesquels persistent indéfiniment. Marqueurs sérologiques de la DG du virus déterminés par dosage immunoenzymatique et radioimmunoanalyse, et ARN-IOP - par la méthode de la réaction en chaîne de la polymérase. Les entreprises biotechnologiques industrielles nationales et étrangères produisent des kits de diagnostic comprenant tous les composants et réactifs nécessaires au test. Dans les préparations de diagnostic, on utilise un antigène delta dérivé du foie de marmotte infecté expérimentalement avec la HD; antigène isolé du foie de porteurs morts de PIO; Antigène delta, obtenu par génie génétique.

Diagnostic en laboratoire de l'hépatite C (HS) La découverte de l'agent responsable du SH est devenue possible grâce aux méthodes de biologie moléculaire de 1989-1991. Tout d'abord, le génome viral a été obtenu par clonage à partir du sérum de patients atteints d'hépatite «ni-A, ni-B», puis la structure du virus a été établie. La caractérisation physicochimique du virus a permis de classer le VHC dans la famille des flavovirus. Le génome du virus HS (HCV) est représenté par un ARN simple brin, constitué de 10 000 bases de nucléotides, formant des régions qui codent pour trois protéines structurelles (C, E1, E2) et cinq non structurelles (NS2, NS3, NS4, NS5). Une caractéristique du VHC est l'extrême hétérogénéité de son génome. L'analyse des acides nucléiques ARN-VHC de différents isolats a révélé des différences significatives dans leur structure primaire. Sur la base de ces données, une classification du VHC a été construite, en les divisant en variantes (6 à 9) et en sous-types-génotypes, dont certains sont présents dans toutes les régions du monde et d'autres uniquement dans des pays individuels. Le diagnostic en laboratoire de l'HS a été résolu à l'aide de méthodes modernes de biologie moléculaire, étant donné que lorsque le virus est à des concentrations extrêmement basses et que ses antigènes ne sont pas disponibles pour la détection à l'aide de méthodes d'indication modernes, les efforts des chercheurs sont centrés sur la détection d'anticorps dirigés contre divers composants antigéniques du virus. Indiquer la présence d'un virus. Les antigènes utilisés étaient des protéines codées par la zone structurelle et non structurelle de l’ARN-VHC, obtenues par synthèse ou technologie recombinante (les polypeptides utilisés dans les méthodes immunologiques modernes sont C22-3; C33c, C100-3, C200, NS5, S-1-1). ). Le diagnostic de HS en laboratoire repose sur la détection de marqueurs sérologiques du VHC: anticorps dirigés contre le virus HS (anti-HCV, IgM anti-HCV, IgG) par ELISA et ARN-HCV par PCR. À ce jour, quatre générations de systèmes de test ont été développées pour détecter l'anti-VHC dans la méthode ELISA, mais la méthode ELISA de première génération n'est pas utilisée actuellement en raison de sa faible sensibilité. L'ARN-VHC est un indicateur de la réplication active du VHC et le premier marqueur d'infection. Il peut être détecté par la réaction en chaîne de la polymérase dès 1 à 2 semaines après l'infection, peu de temps avant l'augmentation des taux de transaminases sériques. L'anticorps anti-VHC est détecté 5 à 6 semaines après le début de l'hépatite dans 80% des cas et à la 12e semaine chez 90% des personnes utilisant le dosage immunoenzymatique. Lors de la détermination de l'anti-VHC, dans certains cas, une réaction faussement positive est enregistrée. Afin de distinguer les échantillons faussement positifs des échantillons contenant réellement des anticorps anti-VHC, des tests supplémentaires ont été développés - immunoblot recombinant, détermination du spectre des protéines anti-VHC. Les diagnostics d'immunoempreinte permettent d'exclure des résultats non spécifiques obtenus par ELISA. Cependant, une évaluation visuelle des bandes d'immunoempreinte peut être ambiguë dans différents centres de diagnostic. Dans notre pays, les systèmes de test immunoenzymatiques de confirmation domestiques (appelés systèmes Spektr) reposent sur la détection des anticorps dirigés contre des antigènes viraux spécifiques: les noyaux NS3, NS4ab et NS5a se sont répandus. La détection de l'ARN du VHC est considérée comme la norme «d'or» dans le diagnostic de l'HS et la confirmation des résultats positifs de la détection des anticorps anti-VHC. Actuellement, la PCR sous forme qualitative et quantitative est utilisée pour indiquer l'ARN du VHC. La sensibilité des méthodes de détermination de l'ARN du VHC augmente chaque année, atteignant actuellement 10 à 50 copies d'ARN dans 1 ml de sang. Le diagnostic d'HS chronique chez les personnes atteintes d'anti-VHC est généralement posé sur la base de tests hépatiques élevés pendant plus de 6 mois.

Diagnostic de laboratoire de l'hépatite A (HA) Le virus HA (figure 3) est un virus à ARN de 27 nm, classé comme picornavirus. Dans tous les isolats collectés dans différentes parties du monde, il n'y a qu'un seul sérotype du VHA. Le VHA n'a pas d'enveloppe externe, mais consiste en une capsule protéique externe, ou capside, contenant un ARN simple brin positif à l'intérieur, qui sert de matrice pour la production de protéines virales dans la cellule hôte. Le diagnostic de laboratoire de l'HA est basé sur la détection de marqueurs du virus HA - antigène du VHA, anticorps (IgM et IgG anti-VHA), ainsi que de l'ARN du VHA. La preuve finale d'une infection actuelle ou récente est la présence dans le sérum (même dans un échantillon de sérum) d'anticorps dirigés contre l'IgM de classe IgA (IgM anti-VHA) et la présence de VHA dans les fèces. La présence d’anticorps dirigés contre l’HA, ainsi que l’immunité durable, est indiquée par la présence d’anticorps dirigés contre la classe d’IgG anti-VHA (IgG anti-VHA). Le diagnostic d'HA aiguë est confirmé à un stade de récupération aigu ou précoce en présence de la classe des IgM anti-VHA, apparaissant au cours des 5 à 10 derniers jours de la période d'incubation et continuant à être détectée pendant 6 à 7 mois à compter du début de la maladie. De plus, ces anticorps peuvent être détectés au cours des premiers mois chez les individus (20-30%) vaccinés avec le vaccin inactivé contre l'HA. Leur formation est associée à la réponse immunitaire primaire à l'introduction de l'antigène et non à l'infection provoquée par le vaccin. L'ARN du VHA peut être détecté plusieurs jours avant l'augmentation de l'activité de l'ALT et dans les 5 à 59 jours suivant l'apparition de la maladie, avec un cycle typique d'HA; dans les cas prolongés, l'ARN du VHA peut être mesuré en moyenne jusqu'à 95 jours. L'antigène du virus HA (HAV-Ag) se trouve dans les matières fécales des patients 7 à 10 jours avant l'apparition des symptômes cliniques et dans les premiers jours de la maladie, qui est également utilisé pour le diagnostic précoce et l'identification des sources de l'agent infectieux. La concentration de VHA dans les fèces est la plus élevée depuis 2 semaines. avant l'apparition de la jaunisse. Chez l'adulte, l'excrétion du virus avec les matières fécales dure généralement moins d'une semaine après l'apparition de la jaunisse. Cependant, le virus a également été détecté après 2 mois. dès l'apparition de la maladie (pendant l'exacerbation). Les enfants peuvent sécréter le virus plus longtemps que les adultes, éventuellement quelques semaines après la manifestation clinique de la maladie. Les rejets chroniques de VHA dans les matières fécales ne sont pas observés. La définition de l'antigène du VHA a également trouvé une application en virologie sanitaire dans l'étude de l'eau pour la présence d'un virus. Les IgG anti-VHA (Fig. 4) apparaissent également tôt dans le début de la maladie (à partir de 3 à 4 semaines), persistent toute la vie et offrent une protection à vie contre cette maladie. La définition d'IgG anti-VHA est utilisée pour étudier la structure immunologique de la population et la dynamique de l'immunité humorale spécifique. La détermination de la classe d'IgG anti-VHA est également importante pour le dépistage avant et après la vaccination (la concentration minimale protectrice en anti-VHA correspond à 20 UI / l). Pour leur détermination, les fabricants nationaux produisent des préparations commerciales d'immunoanalyse enzymatique de diagnostic. Le diagnostic en laboratoire repose sur la détection de marqueurs du virus HA à l'aide de méthodes immunodiagnostiques spécifiques - méthodes ELISA et RIA. Les entreprises biotechnologiques industrielles nationales et étrangères produisent des kits de diagnostic comprenant tous les composants et réactifs nécessaires au test. Outre les méthodes ELISA et RIA en phase solide, la méthode de microscopie immunoélectronique et la méthode de PCR sont également utilisées avec succès. Toutes les méthodes d'immunodiagnostic avec une probabilité égale mentionnées ci-dessus révèlent des formes inapparentes d'AH, asymptomatiques ou cliniquement prononcées. Une place particulière dans le diagnostic en laboratoire de l'AG est occupée par les méthodes de tests de génétique moléculaire pour l'ARN du VHA. Les diagnostics par PCR peuvent détecter l'ARN du VHA à une concentration de 40 copies / ml. Actuellement, il existe une accumulation de données sur la place de la PCR dans le système de diagnostic en laboratoire de l'AG.

Diagnostic en laboratoire de l'hépatite E (HEU) L'agent étiologique de l'hépatite E (HE) est un virus sphérique dépourvu d'enveloppe externe, il s'agit d'un virus à ARN simple brin d'environ 32–34 nm de diamètre. Lors du diagnostic de l'EH dans chaque cas individuel, plusieurs arguments diagnostiques doivent être pris en compte: - le patient présente un complexe symptomatique d'hépatite aiguë et probablement infectieuse, - une exception fiable à la participation étiologique des virus HA et HBV, basée sur des tests sérologiques négatifs - - une classe IgM anti-VHA et anti-HBs de la classe IgM - une analyse approfondie des données sur les antécédents épidémiologiques, y compris des indications de visites récentes dans des régions endémiques, - une étude (si possible) sur les matières fécales blessées la présence de particules virales par immunomicroscopie UGC, PCR. Il existe des méthodes de diagnostic basées sur l'utilisation d'anticorps immunofluorescents (MFA) pour la détermination de l'antigène du VHE dans les fèces et du dosage immuno-absorbant lié à une enzyme (ELISA) pour la détermination des anticorps anti-VHE anti-VHE des IgM et IgG. La présence d’IgM de classe anti-VHE très fréquente est déterminée dans le sérum de patients atteints d’UC au stade aigu de la maladie et au cours de la période de rétablissement précoce; l'identification de la classe des IgG anti-VHE indique une infection antérieure par l'HU. Pour le diagnostic de GE, l'ARN du VHE est également déterminé. Les fabricants nationaux de systèmes de test de diagnostic pour la détection des marqueurs de l'hépatite virale:

MOSCOU et la région - NEARMEDIC - ECOlab - BIOSERVICE

NOVOSIBIRSK - VECTOR BEST - VECTOR MBS (MEDICOBIOL.SOYUZ) - VECTEUR VERS BIALGAM

BAS DE NOVGOROD - MICROGÈNE (anciennement IMBIO) - SYSTÈMES DE DIAGNOSTIC SAINT-PETERSBOURG - AVICENNA - AQUAPAST


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